复方清脂颗粒是由决明子、泽泻、姜黄、首乌等组成的中药复方,经药效学研究证明能显著降低血脂,大鼠药效学有效剂量为5 g/kg。我们进行了复方清脂颗粒大鼠肝毒性的实验研究。现报道如下。 1 器材与方法 1.1 药品和仪器 复方清脂颗粒,天津中医药大学中医药研究院药学部提供,批号:20050103。天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司;丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,南京建成生物工程研究所。JJ2000型精密电子天平,常熟双杰测试仪器厂;AE200型电子分析天平,梅特勒-托利多仪器有限公司(上海);Micro95型半自动生化仪,荷兰威图科学公司;721分光光度计,上海第三分析仪器厂。 1.2 动物与分组 Wistar大鼠48只,雌雄各半,体重100~120 g,购自北京维通利华实验动物科技有限公司,合格证号:SCXK(京)2002-2003。饲养于天津中医药大学实验动物中心,所用饲料为天津市华荣实验动物科技有限公司生产。实验中动物分成四组:①对照组,②复方清脂颗粒52 g/kg组,③复方清脂颗粒26 g/kg组,④复方清脂颗粒13 g/kg组,每组12只。 1.3 方法 每天上午按相应剂量灌胃给药1次,对照组给予洁净自来水,并观察动物的一般状况,连续8周。禁食12 h后,称动物体重用10%水合氯醛腹腔注射0.3 ml/100 g体重麻醉大鼠。腹主动脉取血5 ml;解剖取肝脏称重,在相同肝小叶上取一块肝组织用福尔马林液固定,常规石蜡包埋、切片,H.E.染色,光镜下做病理组织学检查;另取0.2 g肝组织用生理盐水作成10%的肝匀浆2 ml,用TBA比色法测定肝组织中MDA,将10%肝匀浆用生理盐水稀释成1%,用黄嘌呤氧化酶法测定肝组织中SOD。 1.4 数据处理和统计所有数据用±s表示。复方清脂颗粒各组与对照组之间比较使用t检验。 2 结果 2.1 对大鼠肝脏重及肝系数的影响 复方清脂颗粒52 g/kg组大鼠的肝脏明显增大,肝重显著高于对照组,26 g/kg组也有增大的趋势;52,26 g/kg组大鼠的肝脏系数都显著高于对照组,并呈现较明显的剂量依赖关系。结果见表1。表1 复方清脂颗粒对肝脏重及肝系数的影响(略) 2.2 对大鼠血清中AST,ALT,ALP的影响复方清脂颗粒各剂量组血清中AST,ALT,ALP与对照组均无显著差别。结果见表响(略) 2.4 肝脏病理组织学检查结果光镜下观察,复方清脂颗粒各组肝脏形态结构正常,与对照组无差异,均未见明显病理改变。 3 讨论 复方清脂颗粒52,26 g/kg剂量下肝组织中,MDA水平明显增高,可见在较大剂量复方清脂颗粒下,大鼠肝脏中脂质过氧化程度要较正常高,但是复方清脂颗粒各组中肝组织中SOD的活力并不低还略高于对照组,可见肝中SOD的合成并未受到明显影响。复方清脂颗粒52 g/kg剂量组大鼠肝脏重明显高于对照组,其它2个剂量组也有增大的趋势,联系到机体很多脏器在功能轻度受损时都有代偿性增生,由此来对抗因为部分损伤或者单位效率降低而引起的脏器功能降低。考虑至此,复方清脂颗粒组肝脏增大,肝脏中SOD的不降却略增的趋势可能正是自由基增多,SOD消耗增大而引起肝脏代偿性增生的结果。病理组织学检查,各组大鼠肝脏在光镜下均未见明显病理改变。血清中AST,ALT和ALP的无显著变化,对此作了侧面印证。 受传统思想影响,一贯认为中药无毒、少毒的思想影响,目前国内对中草药的潜在毒性认识和防范不足。复方中的泽泻、决明子在中药传统毒性归类中,均不认为属于毒性的药材,在文献的调研中,仅有极少的文献有关泽泻、决明子的毒性报道[1~3]。高芃等[1]的研究表明,决明子乙醇提取物连续灌胃90 d,5 g/kg就可以造成肝系数的明显升高,13 g/kg AST即有显著升高,肝脏未见明显与药物有关的病理改变;段雪英等[2]报道,33.3 g/kg的泽泻水煎剂能造成肝系数的明显升高,病理组织学检查肝脏没有病理改变。这些报道中的肝脏及相关酶等变化与我们研究中的情况极为相似。复方清脂颗粒26 g/kg剂量下,决明子约为4.35 g/kg,泽泻约为2.60 g/kg,均未达到所报道的毒性作用剂量,这提醒我们,我们应当注意小毒、无毒中药间可能存在的毒性的叠加或协同作用。 复方清脂颗粒组的雌性大鼠3个剂量肝组织中MDA水平均较对照组高,而雄性大鼠只有52 g/kg组较对照组高,相比较而言雌性大鼠的肝脏内脂质过氧化程度似乎更强,这可能与雌性大鼠体内较高的雌激素水平有关。有报道[4],制何首乌13 g/kg剂量,可使部分大鼠轻度肝脂肪病变,雌性大鼠较雄性大鼠多且重。连续给予雌激素类药物乙烷雌酚60 mg/kg的雌性大鼠也有肝毒性表现[5]。在孕妇妊娠期间,某些比较敏感的妇女就可能会发生肝内胆汁淤积。还有其它报道[6,7]也在提示,一定水平雌激素能协同肝损伤的发生。 复方清脂颗粒52 g/kg剂量下肝脏重、肝系数及肝组织中MDA水平均显著高于对照组,26 g/kg剂量下对肝系数及肝组织中MDA水平也有较显著的升高,而13 g/kg剂量下所试各指标与对照组无显著差别,所有组大鼠肝脏病理组织学检查均未见明显病理改变。可见长期灌胃给予复方清脂颗粒52,26 g/kg,对肝脏有一定毒性但没有造成肝脏的器质性损伤,13 g/kg是无毒性作用剂量。【参考文献】 [1]高芃,隋海霞,刘海波,等.决明子乙醇提取物的亚慢性毒性研究[J].中国食品卫生杂志,2004,16(5):410. [2]段雪英,王军波,尹喜玲,等.泽泻60天大鼠喂养试验研究[J].中国食品卫生杂志, 2004,16(2):108. [3]Yuen MF,Tam S,Fung J,et al. Traditional Chinese medicine causing hepatotoxicity in patients with chronic hepatitis B infection: a 1-year prospective study[J]. Aliment Pharmacol Ther,2006,24(8):1179. [4]胡锡琴,杨红莲,张晓琴,等.制何首乌对大鼠肝脏毒理的实验研究[J].陕西中医学院学报,2006,29(3):40. [5]Hart J. Hepatotoxicity of the synthetic oestrogen hexoestrol in the female rat[J].Arch Toxicol,1986,59(4):216. [6]Fabio F ,Cardina R ,Bortolami M, et al. Estrogens receptors and oxidative damage in the liver[J].Mol Cell Endocrinol,2002,193(1-2):85. [7]田小芸,孙敬方,潘震寰.雌激素和胆酸对大鼠肝胆功能影响的实验研究[J].江苏医药杂志,2001,27(6):420.